Ateneo - UPO

Significato della misura in ambito biologico.
Tecniche di preparazione del campione.
Principi di spettrofotometria.
Principi alla base della cromatografia.
Principi alla base dell'elettroforesi.
Tecniche per la caratterizzazione di proteine.
Applicazioni degli anticorpi nelle biotecnologie.
Utilizzo di enzimi in diagnostica ed in ricerca.
Saggi di binding ed associazione.

"Introduzione alla biochimica di Lehninger"
David L. Nelson &Michael M. Cox
Zanichelli

Le esercitazioni mirano a far acquisire le capacità pratiche richieste per l’utilizzo delle tecniche biochimiche di base e per un proficuo internato di tesi.
Le lezioni di teoria del laboratorio presentano tecniche avanzate che le studentesse e gli studenti incontrano nella letteratura scientifica.

Le studentesse e gli studenti DEVONO aver frequentato con successo il corso "sicurezza nei laboratori chimici e biologici".
Sono propedeutiche le conoscenze sulla struttura e proprietà delle molecole fornite dalla chimica inorganica e chimica organica.

Il corso comprende:
- lezioni frontali sulle principali tecniche
- simulazioni con software specifici delle principali tecniche utiizzate nei laboratory di biochimica
- esercitazioni in laboratori didattici chimico-biologici.
La frequenza è obbligatoria.

Al termine del laboratorio pratico (entro una settimana dalla fine del del proprio turno in laboratorio) la studentessa e lo studente e presenterà un quaderno di laboratorio che riassume e attesta la comprensione delle attività eseguite.
Entro la fine di dicembre svolgerà delle esercitazioni online sul DIR che, insieme al rendimento in laboratorio, costituiranno la base per la successiva valutazione.

Le studentesse e gli studenti con disabilità o con Disturbi Specifici dell’Apprendimento (DSA) o con Bisogni Educativi Speciali (BES) possono richiedere servizi e strumenti specifici a loro dedicati rivolgendosi allo Staff Sviluppo e Coordinamento Carriere e Servizi alle Studentesse e agli Studenti e consultando la pagina dedicata del sito di Ateneo: https://uniupo.it/it/servizi/servizi-studenti- disabili-e-dsa
Le studentesse e gli studenti con disabilità, DSA, BES, una volta preso contatto con lo Staff di Ateneo, possono contattare la/il docente titolare dell'insegnamento in relazione alla declinazione delle modalità di esame, in merito agli aspetti didattici.

Tutte le studentesse e tutti gli studenti che avranno frequentato le lezioni teoriche ed il laboratorio saranno valutati sulla base dei risultati ottenuti nelle esercitazioni online, alla qualità del quaderno di laboratorio e al rendimento in laboratorio.

Conoscere il laboratorio, strumentazione, misurare, diluire, preparazione di una curva di taratura. Utilizzo di excel per la costruzione di una curva di taratura ed esercitazioni pratiche.
Come redigere un quaderno di laboratorio
Come leggere e interpretare un protocollo
Teoria ed esercitazione pratiche sulla preparazione di soluzioni.

Significato della misura in ambito biologico: specificità, accuratezza, precisione e riproducibilità.

Tecniche di preparazione del campione per analisi biochimiche (omogenizzazione, lisi con detergenti). Estrazione con solventi e precipitazione selettiva, loro applicazione al frazionamento dei composti biologici. Teoria della centrifugazione e tecniche di centrifugazione preparativa per il frazionamento di composti biologici. Utilizzo delle centrifughe e forza centrifuga.
Principi di spettrofotometria. Saranno trattate le basi teoriche e gli aspetti pratici delle tecniche spettroscopiche (assorbimento, fluorescenza, polarimetria) ed esempi del loro utilizzo per la quantificazione di analiti biologici. Caratteristiche di uno spettrofotometo ed un fluorimetro, loro utilizzo.

Principi alla base della cromatografia, principali tecniche cromatogafiche (affinià, gel filtrazione, scambio ionico e fase inversa) e relative matrici. Utilizzo della cromatografia per la separazione di miscele complesse di proteine e di lipidi in base alle proprietà chimiche e fisiche. Strumentazione utilizzata (cromatografie su colonna, su strato sottile, HPLC, ecc). Rivelatori ed analisi risultati (coefficienti di ritenzione, analisi qualitative e quantitative).
Principi alla base dell'elettroforesi con particolare attenzione al frazionamento e caratterizzazione delle proteine. IEF, SDS-PAGE, 2D-PAGE, elettroforesi capillare. Sistemi di rilevazione più comuni: coloranti e western blotting.

Utilizzo di enzimi in diagnostica ed in ricerca. Caratterizzazione della cinetica enzimatica e studio degli inibitori. Utilizzo di enzimi in diagnostica clinica, assay cinetici ed end-point applicati alla ricerca ed alla diagnostica. Analisi di parametri cinetici di un enzima.

Saggi di binding ed associazione, analisi dell’equilibrio recettore-ligando.

Le studentesse e gli studenti acquisirannno la conoscenza delle principali metodologie biochimiche con particolare enfasi allo studio delle proteine. Tali saperi sono utili per la lettura critica della letteratura tecnica.
Le esercitazione consentono di muoversi fruttuosamente in laboratorio anche in vista del tirocinio di laurea. A tale scopo la pratica nella compilazione del quaderno di laboratorio risulta importante.